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ELISA试剂盒常见问题及解决方法二

2025-02-17
①问题:高背景或阴性对照值偏高?

1、可能原因: 洗板不充分!   解决办法:将洗涤液注入反应孔充分洗涤,彻底拍干孔中液体.

2、可能原因: 酶结合物过量! 解决办法:检查酶稀释度,按说明书标识的稀释度稀释.

3、可能原因: 底物污染! 解决办法:加底物前检查底物是否为透明无色,请勿用变蓝的底物,重新用新的底物试验.

4、 可能原因: 阴性对照孔被阳性对照污染! 解决办法:注意洗涤时不要把洗液溢出孔外,不使阴阳对照孔液体涟接一起.
5、 可能原因: 不同批次试剂混用! 解决办法:检查试剂批号,请勿用不同批次试剂.

②问题:显色信号弱?

1、可能原因: 试剂过期!   解决方法:检查试剂盒有效期,请勿用过期试剂.

2、可能原因: 孵育时间过短!   解决方法:按说明书中规定的时间孵育.

3、可能原因: 试剂污染!   解决方法:检查试剂是否污染,请勿用污染的试剂.

4、可能原因: 酶标仪滤光片不匹配!   解决方法:检查酶标仪设置及滤光片是否匹配.

5、可能原因: 试剂盒平衡不充分!   解决方法:确保试剂盒试验前平衡至室温.

6、可能原因: 显色时间不够 !   解决方法:增加底物显色时间.

③问题:无显色信号?

1、可能原因: 检测抗体、酶、或显色剂漏加!   解决方法:检查试验操作流程,重复试验.

2、可能原因: 酶被叠氮钠污染!   解决方法:请使用重新配制的试剂.

3、可能原因: 试剂添加顺序有误!   解决方法:检查复核试验添加顺序、流程,重复试验.

④问题:标曲佳但样品孔无信号?
1、可能原因: 样品中靶标物含量低或样品中无靶标物!   解决方法:设置阳性对照,重复实验

2、可能原因:样品基质效应影响检测!   解决方法:重新稀释样品后复测

⑤问题:标曲佳但样品信号偏高?

1、可能原因: 样品中待检物含量超过标准曲线范围!   解决方法:重新稀释样品后复测.

⑥问题:边缘效应 ?

1、可能原因: 孵育温度不均衡!   解决方法:孵育时每步均使用新的封板胶纸,避免在环境温度变化大的地方孵育,勿叠放反应板.